2023年爬山虎的籽能吃吗爬山虎籽总黄酮提取及鉴别.docx

爬山虎的籽能吃吗【爬山虎籽总黄酮提取及鉴别】 　　[] 目的:研究爬山虎中黄酮的鉴别及总黄酮的提取工艺。方法:采用传统溶剂浸提法进行常规的化学定性分析确定爬山虎籽中含有黄酮类化合物,并采用五因素四水平的正交试验优化提取工艺。结果:实验证实爬山虎中含有大量黄酮类化合物。正交实验得出了最正确提取工艺条件:提取温度为50℃,料液比为1∶12,提取时间为3 h,提取剂为pH=2的65%乙醇溶液。以芦丁为标准品,用紫外分光光度法测定爬山虎籽中总黄酮含量为2.3%。结论:爬山虎籽中含有丰富的黄酮类化合物,优化并建立了爬山虎籽中总黄酮的提取工艺条件。 　　[关键词] 爬山虎籽;黄酮类化合物;定性分析;正交试验;含量测定 　　[中图分类号] R943[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2022)06(c)-065-02 　　 　　Extraction techniques and identification of flavonoids in parthenocissus seeds 　　SHI Jun1, HAN Xuan2, ZHANG Yanjun1, SUN Tijian1, DIAO Haipeng1, CAO Xiaofeng1x 　　(1.Department of Chemistry, Shanxi Medical University, Shanxi 030001, China; 2.Health Vocational & Technical College,Hebei University, Baoding 071002, China) 　　[Abstract] Objective: To make a comprehensive study on identification and extraction technology of flavonoids from the parthenocissus seeds. Methods: Traditional solvent extraction method and orthogonal experiments were used. Flavonoids in the parthenocissus seeds were confirmed by conventional qualitative analysis. Results: The research showed that the parthenocissus seeds contain flavonoids. The optimum technical condition were summed up as follows through the orthogonal experiments: extraction temperature was at 50℃, proportion material and extracting reagent was 1∶12, the extracting time was 3 h, extracting reagent was 65% aqueous ethanol solution, and pH=2. Comparing to ruitin standard, extraction rate of flavonids in parthenocissus seeds was 2.3% by UV spectrophotometry. Conclusion: Flavonoids is rich in the parthenocissus seeds. The preliminary extracting technology of flavonoids from the parthenocissus seeds is established in the study. 　　[Key words] Parthenocissus seeds; Flavonoids; Qualitative analysis; Orthogonal experiments; Determination 　　 　　黄酮类化合物是天然药用植物的主要活性成分之一,其众多的生理功能使其在医疗方面应用较为广泛,可以预防高血压,具有保肝、降血脂、降胆固醇等多种功能[1-3]。此外,它还是重要的功能食品添加剂、天然抗氧化剂、天然色素,对它的开发研究已引起了国内外的广泛重视,研究进展很快[3]。爬山虎(Parthenocissus tricuspidate plach)属于葡萄科爬山虎属落叶多年生木质藤本攀缘植物[4]。爬山虎的根茎可入药,果实可酿酒,综合利用价值很大[5],但迄今为止,对爬山虎的研究甚少,对于爬山虎籽中总黄酮的研究尚未见报道。本文对爬山虎籽中黄酮的定性、提取工艺及含量测定进行了研究,以期为爬山虎籽的开发利用提供依据,为爬山虎的综合开发奠定根底。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　60-CRT双光束紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器);800型离心沉淀机(上海手术器械厂);HH-S型温水浴锅(江苏金坛市医疗仪器厂);pHS-3C精密pH计(上海雷磁仪器厂)。 　　1.2 试药 　　爬山虎果实采集于校园,剥离取籽;芦丁标准品(中国生物制品研究所,纯度:99.99%,批号:202215345);95%乙醇、无水乙醇、三氯化铝、三氯化铁等均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 样品处理 　　爬山虎籽减压真空枯燥后,粉碎过40目筛,用石油醚浸提6 h,脱去脂溶性成分,抽滤,将脱脂后的爬山虎籽真空烘干备用。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取芦丁标准品0.002 5 g,置于25 ml量瓶中,加乙醇溶解并定容至刻度,制成0.1 mg/ml的对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　精密称取爬山虎籽脱脂粉末2.000 g,用酸性乙醇20 ml浸泡3 h,参加NaCl饱和,离心,取上清液1 ml,置25 ml量瓶中,再用乙醇溶液稀释并定容至刻度,制备成爬山虎籽的供试品溶液。 　　2.4 测定波长的选择 　　以乙醇作空白,在紫外分光光度计上200～800 nm扫描,芦丁标准品、爬山虎籽提取溶液均在350 nm处有最大吸收峰,应选择350 nm作为测定波长。 　　2.5 爬山虎籽中黄酮类物质的定性研究 　　参照文献[2-6]进行定性研究,用滴管取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈棕色并有荧光斑点。将滤纸在氨水上方熏0.5 min,立即在紫外光下观察,呈黄绿色荧光斑点;再取样品溶液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液,吹干,呈灰黄色,在紫外光下呈黄绿色荧光斑点;再取样品溶液点在滤纸上,滴加1%醋酸钠溶液,吹干,呈淡黄色,并进行纸层析实验,紫外灯下可见荧光斑点[8];最后对样品的甲醇溶液进行紫外扫描,在200～400 nm的区域内存在两个主要的紫外吸收带,即为峰带Ⅰ(300～400 nm)及峰带Ⅱ(220～280 nm),可确定爬山虎籽中存在有黄酮类化合物[3]。 　　2.6 标准曲线的制备[6-7] 　　精密称取0.010 0 g的芦丁标准品,置100 ml量瓶中,用乙醇溶解,并定容至刻度。准确吸取0.10、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00 ml芦丁标准品溶液于相应编号的10 ml量瓶中,定容至刻度,摇匀并静置10 min后于350 nm处测定吸光度。所得标准曲线:C=0.040 5A-0.000 7(r=0.999 2),其线性范围为0.001～0.030 mg/ml。 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 　　2.7 单因素试验 　　精密称取2.000 g脱脂烘干的粉末样品,进行爬山虎籽黄酮类化合物提取,分别考察溶剂类型、提取次数等因素对提取效果的影响。 　　2.8 正交试验 　　在单因素的根底上,以温度、液料比、提取时间、溶剂浓度、酸度为考察因素,以测得的黄酮类物质的提取量为考察指标,选用五因素四水平正交表L16(45)分析以上因素对黄酮类化合物提取效果的影响,并对爬山虎籽中黄酮类化合物的提取工艺进行优化实验。结果见表1。 　　 　　表 1 正交试验结果 　　Tab.1 Results of orthogonal test 　　 　　2.9 样品含量测定 　　精密称取2.000 g脱脂烘干的粉末样品于100 ml三角瓶中,参加一定浓度的酸性乙醇溶液适量,在适当温度下提取一定时间后,参加NaCl饱和,离心别离,吸取0.10 ml上清液于10 ml量瓶中,乙醇定容至刻度,摇匀并静置10 min后,于350 nm处测定其吸光度。 　　3 讨论 　　通过比较吸光值的大小,考察了甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、水等各种溶剂对爬山虎籽黄酮类物质提取效果的影响,可知选择乙醇溶液较好。对于料液比,提取效果随着料液比的增大而增大,当料液比到达一定程度时,提取效果趋于稳定。过大的溶剂用量会造成溶剂和资源的浪费,料液比为1∶12是较适宜的。随着提取时间的增加,响提取效果趋于稳定,过长时间的提取,造成提取效率的降低。结果说明,提取时间为3 h左右的效果最好,时间过长,对于提取的意义不大。随着提取温度的升高,提取的黄酮类化合物也增加,50℃时到达最大。超过50℃时,可能是色素类的化合物结构破坏而降低,导致提取效果降低。一般温度应选择50℃为宜。随着pH的增加,提取效果明显降低,故爬山虎籽中黄酮类的化合物应在强酸性条件下进行提取。 　　由表2极差结果可知,第5列即因素E(酸度)的极差最大,是笔者考虑的主要因素,它的四个提取水平中,以第二水平最大,所以第二水平最好。第一、二、三因素A、B、C(温度、液料比、提取时间)的极差次于E,均是第二水平为最正确。溶剂浓度D对应的影响最小。通过此极差分析法可以得出如下结论:各因素对实验指标的影响按大小排列为E>B>C>A>D,极差优选出的最好实验方案为A2B2C2D2E2,即提取温度为50℃,料液比为1∶12,提取时间为3 h,溶剂浓度为65%,酸度为pH=2。为了进一步确证,进行优化组合A2B2C2D2E2的验证实验,测得该方案下实验的吸光度为0.586。故在此条件下提取液中黄酮类化合物的含量最高,提取效果最正确,并通过计算得出爬山虎籽中总黄酮含量为2.3%。 　　通过对爬山虎籽提取物进行定性实验,可以确定其含有黄酮类化合物,并选择黄酮类化合物峰带Ⅱ中的350 nm作为测定波长;通过单因素实验可知提取次数、浸提温度、料液比、提取时间、溶剂浓度、酸度对提取效果有影响;通过正交实验,确定了爬山虎籽中黄酮类化合物的最正确提取工艺条件:提取温度为50℃,料液比为1∶12,提取时间为3 h,溶剂浓度为65%,酸度为pH=2;建立了爬山虎籽中黄酮类化合物的测定方法,线性范围为0.001～0.030 mg/ml。按最正确工艺条件提取,所得爬山虎籽中总黄酮含量为2.3%,这说明爬山虎籽中黄酮类化合物的含量丰富。 　　[参考文献] 　　[1]陈季武,胡天喜,朱大元.11种黄酮类化合物去除超氧阴离子的构效关系研究[J].中国药学杂志,2002,37(1):57-58. 　　[2]汤容,樊瑞霞.大豆异黄酮抗癌作用的研究进展[J].中国药学杂志,1999, 34(7):435. 　　[3]吴立军.天然药物化学[M].北京:人民卫生出版社,2022. 　　[4]中国植物志编委会.中国植物志[M].48卷2分册.北京:科学出版社,1998. 　　[5]冯大领,孟祥书,崔彬彬,等.爬山虎属植物的研究现状及展望[J].河北林果研究,2022,3(21):272-275. 　　[6]Chattip Pro