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海南省汉、黎族人群缺失型α-地中海贫血的研究.doc
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海南省 黎族 人群 缺失 地中海贫血 研究
关键词:地中海贫血;聚合酶链反应(PCR);少数民族;海南省   摘要:目的研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4.2)三种α-地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4.2)三种α-地中海贫血缺失突变。结果在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者,携带率为12.69%;三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.0635,其中--SEA、-α3.7和-α4.2的基因频率分别为0.0127、0.0305、0.0203,共发现--SEA/αα、-α3.7/αα和-α4.2/αα三种基因型,其中--SEA/αα5例,-α3.7/αα12例,-α4.2/αα8例。在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者,携带率为56.72%,三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.3607,其中--SEA、-α3.7和-α4.2的基因频率分别为0.3607、0.0075、0.1891,共发现--SEA/αα、-α3.7/αα、-α3.7/-α3.7、-α3.7/-α4.2、-α4.2/αα、和-α4.2/-α4.2六种基因型,其中--SEA/αα3例,-α3.7/αα39例,-α3.7/-α3.76例,-α3.7/-α4.218例,-α4.2/αα38例,-α4.2/-α4.210例。结论海南省汉、黎族人群是α-地中海贫血的高发群体。   关键词:地中海贫血;聚合酶链反应(PCR);少数民族;海南省   Investigationintothedeletiontypesofα-thalassemiainHanandLINationalitiesinHainanProvince.     Abstract:ObjectiveToinvestigatetheincidences、theallelicfrequenciesandthegenotypesfrequenciesofthreeα-tha-lassemiadeletiontypes(--SEA、-α3.7、-α4.2)andtheirdistributionsinHanandLinationalitiesinHainanProvince.MethodsThreeα-thalassemiadeletiontypes,i.eSoutheastAsiadeletion(--SEA),rightdeletion(-α3.7)andleftdeletion(-α4.2),werescreenedbasedonpolymerasechainreaction(PCR)inHanandLinationalitiesinHainan.Results25carriersweredetectedin197Hanindividuals,andtheincidenceofcarrierswas12.69%.Thegenefrequencyofthesethreedeletiontypeswas0.0127,0.0305and0.0203respectively,totally0.0635inHannationalityinHainan.Threegenotypesof5(--SEA/αα)cases,12(-α3.7/αα)casesand8(-α4.2/αα)casesweredetected.Onthecontrary,114carriersweredetectedfrom201individualsinLinationality,andtheincidenceofcarrierswas56.72%.Thegenefrequencyofthesethreedeletiontypeswas0.0075,01716and0.1891respec-tively,totally0.3607inLinationality.Sixgenotypesweredetectedincluding3(--SEA/αα)cases,39(-α3.7/αα)cases,6(-α3.7/-α3.7)cases,18(-α3.7/-α4.2)cases,38(-α4.2/αα)casesand10(-α4.2/-α4.2)cases.ConclusionThereisahighincidenceofα-thalassemiainHanandLinationalitiesinHainanprovince. [!--empirenews.page--]   Keywords:Thalassemia;Polymerasechainreaction(PCR);Minoritynationality;HainanProvince   α-地中海贫血(α-地贫)是一种严重危害人类健康的遗传病,其主要特征是α-珠蛋白链合成减少(α+地贫)或缺如(α0地贫)。α-地贫分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失突变两大类[1],α-珠蛋白基因缺失是导致α-地贫的主要原因。目前全世界已发现了35种α-珠蛋白基因缺失突变,在中国人中已发现7种,其中东南亚型缺失突变(--SEA)、右侧缺失型突变(-α3.7)和左侧缺失型突变(-α4.2)三种突变类型是我国南方最常见的缺失类型[2~4]。为了研究海南省汉、黎族人群中α-地中海贫血的发病率及其基因型的分布特点,我们应用聚合酶链反应(PCR)技术直接筛查197例海南汉族人和201例海南黎族人中的东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失这三种最常见的缺失型α-地贫突变类型,现将结果报告如下。   1材料与方法   1.1DNA样品用EDTA抗凝,采取海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县正常体检、兵检和中小学生黎族人末梢血;采取海南省文昌市正常体检、兵检的海南籍汉族人群末梢血,按Lahiri等方法[5]提取DNA,阳性对照标本由南方医科大学医学遗传学教研室徐湘民教授惠赠。   1.2PCR扩增东南亚型缺失突变分析按文献[6]进行;右侧缺失型突变和左侧缺失型突变分析参照AmoldS.-C.Tan[7]等报道合成引物。扩增--SEA、-α3.7和-α4.2的多重PCR体系均采用TaKaRaLATaqTMJ及缓冲液(宝生物工程有限公司产品),PCR反应体积为25μl,在PCR缓冲液(1×GCBufferⅡ,2.5mmol/LMgCl2)中含模板DNA0.2μg,引物0.2~0.5μmol/L,dNTP为200μmol/L,1UTaqDNA聚合酶,循环参数为99℃变性5min,85℃加酶,56℃退火1min,72℃延伸2min,然后95℃1min,56℃1min,72℃2min,30个循环后72℃延伸7min。扩增产物在1%琼脂糖凝胶中电泳,经EB染色在紫外光灯下观察结果并照相。   2结果   2.1--SEA、-α3.7和-α4.2缺失型突变的多重PCR扩增在PCR反应体系中同时扩增了α2基因的一个1800bp的片段,用以判断样品DNA的α2基因是否缺失,从而判断α-地中海贫血突变患者是杂合子还是纯合子。无--SEA、-α3.7和-α4.2缺失型突变的正常人DNA样品经PCR扩增后只出现一条1800bp的α2基因扩增片段;东南亚缺失型杂合子(--SEA/αα)的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的α2基因扩增片段外,还出现一条740bp的特异扩增片段;右侧缺失型杂合子(-α3.7/αα)的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的α2基因扩增片段外,还出现一条2022bp的特异扩增片段;右侧缺失型纯合子(-α3.7/-α3.7)的DNA样品经PCR扩增后只出现一条2022bp的特异扩增片段;左侧缺失型杂合子(-α4.2/αα)的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的α2基因扩增片段外,还出现一条1628bp的特异扩增片段;左侧缺失型纯合子(-α4.2/-α4.2)的DNA样品经PCR扩增后只出现一条1628bp的特异扩增片段;右侧缺失型并左侧缺失型双重杂合子(-α3.7/-α4.2)的DNA样品经PCR扩增后同时出现2022bp和1628bp两条特异扩增片段。见图1。 [!--empirenews.page--]  图1--SEA、-α3.7和-α4.2缺失型突变的多重PCR检测结果(略)   Fig1ThePCR-amplifiedresultof--SEA、-α3.7、-α4.2deletion   注:M为GeneRulerTMDNALadder(华美产品),泳道1-7对应的样本基因型分别为aa/aa,--SEA/αα,-α3.7/αα,-α3.7/-α3.7,-α4.2/αα,-α4.2/-α4.2,-α3.7/-α4.2。   M:Themarker(GeneRulerTMDNALadder).Thegenotyesofsamplescorrespondingtofromlane1tolane7wereaa/aa,--SEA/αα,-α3.7/αα,-α3.7/-α3.7,-α4.2/αα,-α4.2/-α4.2,-α3.7/-α4.2.   2.2 海南汉、黎族人群中α-地中海贫血(-- SEA 、-α 3.7 、-α 4.2 )等位基因频率(见表1)。三种缺失在海南汉族人群中的频率分别为0.0127、0.0305和0.0203,在黎族人群中的频率分别为0.0075、0.1716和0.1891。两个人群中的三种缺失型α-地中海贫血突变经χ 2 检验均符合Hardy-Weinbery遗传平衡。  2.3 海南省汉、黎族人群中-- SEA 、-α 3.7 和-α 4.2 缺失突变的基因型(见表2)。在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者,携带率为12.69%,共发现-- SEA /αα、-α 3.7 /αα和-α 4.2 /αα三种基因型,其中-- SEA /αα5例,-α 3.7 /αα12例,-α 4.2 /αα8例;在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者,[1][2]下一页 携带率为56.72%,共发现- -SEA /αα、-α 3.7 /αα、-α 3.7 /-α 3.7 、-α 3.7 /-α 4.2 、-α 4.2 /αα和-α 4.2 /-α 4.2 六种基因型,其中-- SEA /αα3例,-α 3.7 /αα39例,-α 3.7 /-α 3.7 6例,-α 3.7 /-α 4.2 18例,-α 4.2 /αα38例,-α 4.2 /-α 4.2 10例。   表1 海南省汉、黎族人群中三种α-地中海贫血缺失突变的等位基因频率(略)  Tab1 The allelic frequencies of threeα-thalassemia deletion mutation(-- SEA 、-α 3.7 、-α 4.2 )in Han and Li nationalities of Hainan provinc   表2 海南省汉、黎族人三种缺失型α-地中海贫血突变的基因型结果(略)  Tab2 The genotypes of threeα-thalassemia deletion(-- SEA 、-α 3.7 、-α 4.2 )in Han and Li nationalities of Hainan Province   3 讨论   α-地中海贫血是一种遗传性溶血性血液疾病,也是世界上最常见的单基因遗传病之一,其主要特征是α-珠蛋白链合成减少(α + 地贫)或缺如(α 0 地贫)。我国南方各省是该病的高发地区。因此,研究我国南方各省分的α-地中海贫血的基因类型和频率分布,对开展遗传咨询和确定有效的普查法、产前诊断策略具有重要意义。   以聚合

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