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临床血液学检验 2017.4.15 关于细胞化学染色检验 一、铁染色 健康人骨髓中的铁主要存在于骨髓小粒和幼红细胞中。细胞外铁：反映体内储存铁，主要存在于骨髓小 骨髓中铁 粒的巨噬细胞中 细胞内铁：存在于中幼红细胞，晚幼红细胞及 红细胞中的铁（包括铁粒幼红细胞，铁粒红细胞）铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞，分为、型及环形铁粒幼红细胞。环形铁粒幼红细胞：指幼红细胞胞质内蓝色颗粒在5颗以上，围绕核周三分之一以上者。铁粒红细胞：成熟红细胞中出现铁颗粒称为 关于细胞化学染色检验 参考范围：1、细胞外铁：（）（）2、细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率在12%44%，以型为主。无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞。临床意义：1、缺铁性贫血：细胞外铁阴性，细胞内铁阳性率明显下降或为零。2、铁粒幼细胞贫血：铁粒幼红细胞增多，其中环形铁粒幼红细胞增多，有时可见到铁粒红细胞，细胞外铁也常明显增多。关于细胞化学染色检验 二、中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）主要存在于中性成熟粒细胞（包括中性杆状核粒细胞和分叶核粒细胞）胞浆内，故中性成熟粒细胞胞浆呈阳性，其他细胞基本呈阴性。NAPNAP增高增高 NAPNAP减弱减弱 应用于疾病的鉴别 类白血病反应 慢性粒细胞白血病（慢性期）细菌性感染 病毒性感染 再障 阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）恶性淋巴瘤 急性淋巴细胞白血病 急性粒细胞白血病 关于细胞化学染色检验 三、过氧化物酶染色（POX）主要为髓过氧化物酶(MPO),MPO是人类中性粒细胞含量最多的一种蛋白质。分化差的原始粒细胞为阴性，分化好的原始粒细胞至中性成熟粒细胞呈阳性，且随着细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强，衰老的粒细胞阳性程度减弱，甚至阴性。嗜酸粒细胞阳性最强，嗜碱粒细胞阴性。临床意义：POX染色是辅助判断急性白血病细胞类型的首选的、最重要的细胞化学染色。关于细胞化学染色检验 四、苏丹黑染色（SBB）SBB染色临床意义基本同POX染色，其特异性低于POX，但敏感性高于POX染色。故患者POX染色阴性者可加做SBB染色补充。五、过碘酸-雪夫反应（糖原染色）1、红细胞系统疾病，红血病、红白血病、骨髓增生异常综合症中有核红细胞可阳性（呈均匀红色或块状）2、急性淋巴细胞白血病时原始淋巴细胞及幼稚淋巴细胞的阳性率增加，呈粗颗粒状或小块状阳性；慢性淋巴细胞白血病时淋巴细胞的阳性率增加，呈粗颗粒或小块状；恶性淋巴瘤时淋巴细胞阳性率高，阳性增强，呈小块状或粗颗粒状。关于细胞化学染色检验 六、酯酶染色（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）NAS-DCE几乎仅出现在粒细胞、其特异性高，因此又称为粒细胞酯酶。（二）-醋酸萘酚酯酶染色（-NAE）存在于单核细胞、粒细胞和淋巴细胞中，是一种中性非特异性的酯酶。单核细胞系统的阳性可被氟化钠抑制，所以做此染色时，通常同时作氟化钠抑制试验。（所谓抑制，是指氟化钠试验的抑制率大于50%）关于细胞化学染色检验 七、酯酶双染色 在同一张涂片上进行两种酯酶染色的方法，一般采用一种特异性酯酶加另一种非特异性酯酶染色，故常用的有-醋酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色。对急性粒-单核细胞白血病的诊断具有独特的价值。关于细胞化学染色检验 八、酸性磷酸酶染色（ACP）主要用于多毛细胞白血病的诊断及脂代谢障碍性疾病的鉴别。ACPACP阳性阳性 ACPACP阴性阴性 戈谢病（PAS阳性）尼曼-匹克病（PAS阴性）多毛细胞白血病（不被酒石酸抑制）恶性淋巴瘤（被酒石酸抑制）关于细胞化学染色检验 小结（一）：白血病类型的鉴别（染色）POX(过氧化物酶染色)-NAE+抑制试验 PAS（过碘酸-雪夫反应）髓系 淋巴系 原、幼淋 抑制试验（-）抑制试验（+）原粒、早幼粒 单核系统来源 确认（特异性酯酶）NAS-DCE 粒系 关于细胞化学染色检验 小结（二）：贫血铁染色 感染NAP染色 白血病POX、PAS、特异性酯酶和非特异性酯酶染色 多毛细胞白血病ACP染色 关于白血病 ALL(急性淋巴细胞白血病)小大大，一不一 L1：以小细胞为主，大小较一致，核染色质较粗，核仁小不清 L2：以大细胞为主，大小不一，核染色质较疏松，核仁较大，1至多个 L3：以大细胞为主，大小一致，核染色质细点均匀，核仁1个或多个明显。胞质嗜碱，深蓝色，有较多空泡。对比异型淋巴细胞：浆细胞型（空泡型）：单核细胞型（不规则型）：幼稚细胞型 关于白血病 AML(急性非淋巴细胞白血病)M0：急性髓细胞白血病微分化型，原始细胞30%，无T、B淋巴细胞系标记，至少表达一种髓系抗原免疫细胞化学或电镜MPO阳性。M1：急性髓细胞白血病未成熟型，骨髓中原始粒细胞90%（NEC）绿色瘤 关于白血病 M2：急性髓细胞白血病部分成熟型，骨髓中原始细胞占30%89%，早幼粒细胞及以下阶段粒细胞10%，单核细胞20%。M2a：以原粒为主 M2b：以异常中性中幼粒细胞为主，t(8;21)(q22;q22)关于白血病 M3：急性早幼粒细胞白血病，骨髓中异常早幼粒细胞30%（NEC）,胞质内有大量Auer小体 最易并发DIC t(15;17)（q22;q12）形成的PML/RARa融合基因是本病最特异的基因标志。M3a：粗颗粒型 M3b：细颗粒型 关于白血病 M4：急性粒单核细胞白血病，骨髓及周围血中有粒系及单核细胞增生，骨髓中的原始细胞30%，单核细胞为20%-80%，其余为粒细胞。M4a：以原粒增生为主 M4b：以原幼单增生为主 M4c：以幼粒、单核细胞增生为主 M4E0：伴嗜酸细胞增多的急性粒单核细胞白血病，除M4特征外，骨髓中异常嗜酸粒细胞增多，常5%t(16;16)(p13;q22)或inv(16)(q13;q22)关于白血病 M5：急性单核细胞白血病；依据分化成熟程度分为：M5a：原始单核细胞型，骨髓原始单核细胞80%M5b：单核细胞型，骨髓原始单核细胞80%，其余为幼稚及成熟单核细胞等。临床上除有一般急性白血病的症状外，浸润症状较为明显，其突出表现为皮肤黏膜的损害，皮肤出现弥漫性丘疹、硬性结节、肿胀等症状。器官浸润表现为肝脾、淋巴结肿大。关于白血病 M6：急性红白血病，骨髓有核红细胞50%，骨髓原始细胞30%或周围血原始细胞30%。M6a：红白血病（红系/粒系型）是红细胞及白细胞两系同时恶性增生性疾病，此亚型定义为骨髓总红系前提细胞占有核细胞50%，原始粒细胞占非红系20%M6b：纯红系白血病，不成熟的红系细胞增生，占骨髓有核细胞80%，无原始粒细胞。关于白血病 M7：急性巨核细胞白血病，骨髓原巨核细胞30%，电镜PPO阳性，血小板膜蛋白b、b/a、a或因子相关抗原（vWF）阳性 其的确证依赖免疫学的分析。关于白血病 慢性粒细胞白血病（CML）：以中晚幼粒细胞增多为主，而其中又以中幼粒细胞为主。最突出的体征是肝脾肿大，就诊时往往已达脐或脐下，质硬、无压痛。t(9;22)(q34;q11)Ph染色体在断点处融合形成bcr/abl融合基因。Ph染色体存在于CML的整个病程中，治疗缓解后，Ph染色体持续存在，因此采用骨髓移植，消除Ph阳性克隆，才可能达到最终治愈。